TNBS三硝基苯磺酸测定方法

TNBS三硝基苯磺酸测定方法是一种常用的蛋白质含量测定方法。该方法基于TNBS（三硝基苯磺酸）与蛋白质中游离的氨基酸在碱性条件下反应生成黄色产物的原理。

实验过程中，首先需要制备TNBS的工作液，将1克TNBS溶于100 ml 0.01 M NaOH中，再加入0.1 g NaHCO3，用去离子水调节至100 ml。然后将待测样品和标准蛋白质溶液加入不同的试管中，加入1 ml的TNBS工作液，混匀后放置于37℃的恒温水浴中反应30分钟。反应结束后加入5 ml的0.1 M HCl停止反应，测定反应产物的吸光度（波长为340 nm）即可。

根据标准蛋白质的吸光度与浓度的关系，可以制作出一条标准曲线。通过比对待测样品的吸光度与标准曲线，即可计算出样品中蛋白质的含量。

需要注意的是，该方法只适用于游离氨基酸含量较高的蛋白质，对于游离氨基酸含量较低的蛋白质测定结果可能会偏低。此外，在测定过程中需要保持反应条件的一致性，如温度、时间、pH等，以确保测定结果的准确性。

总的来说，TNBS三硝基苯磺酸测定方法是一种简单快捷、准确可靠的蛋白质含量测定方法，被广泛应用于生化学、分子生物学等领域。