测定总氨基酸的原理与方法有哪些

总氨基酸是指在酸性条件下，可被酸水解的所有氨基酸的总量。测定总氨基酸的方法有多种，下面就介绍其中的两种方法：

一、二酰氨基烷基化法

该方法是将氨基酸与二酰氯反应生成二酰氨基酸，再通过乙醇氨水溶液的酸水解反应，将二酰氨基酸转化为氨基酸，然后用比色法进行测定。

具体步骤如下：

1. 将样品加入盛有二氯甲烷的烧瓶中，加入等量的二酰氯溶液，摇匀后放置15分钟。

2. 加入乙醇氨溶液，室温下振荡反应30分钟。

3. 加入稀硫酸，进行酸水解反应，使二酰氨基酸转化为氨基酸。

4. 用NaOH调节pH值，使反应液呈弱碱性，然后加入2,4,6-三硝基苯磺酸，形成紫色化合物。

5. 用紫外分光光度计测定吸光度，根据标准曲线计算出样品中总氨基酸的含量。

二、二硫代苯甲酰胺法

该方法是将样品与二硫代苯甲酰胺反应，生成腈基化合物，再用酸水解，将腈基化合物转化为氨基酸，最后用比色法进行测定。

具体步骤如下：

1. 加入等量的二硫代苯甲酰胺溶液，室温下摇匀反应30分钟。

2. 加入稀盐酸，使反应液呈酸性，然后加入硫代乙酸钠，将腈基化合物转化为氨基酸。

3. 用NaOH调节pH值，使反应液呈弱碱性，然后加入二氯化钴溶液，形成紫色化合物。

4. 用紫外分光光度计测定吸光度，根据标准曲线计算出样品中总氨基酸的含量。

以上两种方法均可用于测定总氨基酸的含量，但具体选择哪种方法取决于实验室的设备和实验人员的经验。在进行实验时，应注意操作规范，避免误差的发生。