三羟甲基氨基甲烷(简称Tris)是一种广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲剂,其缓冲作用可在pH 7.0至9.0范围内发挥。在实验中,常常需要配制Tris缓冲液,下面介绍一种简单易行的配制方法。
首先,准备所需的化学试剂:Tris粉末、盐酸(HCl)、稀盐酸、去离子水等。将Tris粉末称取所需量(如10克),放入一个干净的烧杯中,加入适量的去离子水,搅拌使Tris溶解。
将pH计放入Tris溶液中,记录下此时的pH值。根据所需的pH值,加入适量的盐酸调节溶液的酸碱度,直到达到所需的pH值。在调节过程中,需注意每次加入盐酸后,搅拌均匀,再测量pH值,以便及时调整。
当Tris溶液的pH值达到所需值后,使用稀盐酸调节溶液的浓度,以便达到所需的浓度。此时,再次使用pH计检查溶液的pH值是否仍然符合要求。
最后,使用去离子水将Tris缓冲溶液调整至所需的最终体积(如1升),并用无菌过滤器过滤,以去除不溶性物质和微生物,得到最终的Tris缓冲液。
需要注意的是,Tris溶液应该避免与其他化学试剂(如氯仿)混合使用,因为它们可能与Tris发生反应,影响其缓冲性能。此外,Tris溶液应存放于干燥、阴凉的地方,避免受潮和阳光直射,以保证其质量和稳定性。